JIANGXIJOURNAL OF TRADITIONAL CHINESEMEDICINE 苍耳子药材薄层鉴别与含量测定 ★ 吴建伟 付小梅 518110;2.江西中医学院谭道鹏 吴志瑰 裴建国 褚小兰 (1.广东省深圳市观澜人民医院 深 南昌330006) 摘要:目的:建立苍耳子药材的薄层鉴别及其中绿原酸的含量测定方法。方法:运用薄层色谱鉴别、高效液相色谱法测定,色 谱柱为Zorbax Cl8(250 mm×4.6 mm,5 m),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(10:90),流速:1.0 mE/分钟,检测波长327 nm。 结果:绿原酸在0.142 1—3.552 0 tLg范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为99.86%,RSD=0.5%。结论:本法方 便,准确,可用于苍耳子药材的质量控制。 关键词:苍耳子;绿原酸;薄层鉴别;含量测定 中图分类号:R 284.1 文献标识码:B 苍耳子为菊科植物苍耳Xanthium sibiricum Patrin ex Widder.带总苞的果实,作为常用中药材被 历版中国药典收载,用于治疗风寒头痛、鼻渊流涕、 风疹瘙痒、湿痹拘挛等……。绿原酸具有广泛的抗 菌消炎、利胆、止血及增高白血球数量的作用 ]】 , 为苍耳子药材的有效成分之一。目前,苍耳子药材 2005年版一部附录ⅥB)试验,分别吸取上述三种溶 液各5 l,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合 剂的硅胶G板上,以甲苯.乙酸乙酯一甲酸(5:4:1)为 展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液, 在105 oC加热使斑点显色清晰,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照 品色谱相应的位置上,分别显相同颜色的荧光斑点。 2.2绿原酸的含量测定 质量控制仅限于显微及薄层鉴别,尚无含量测定的 报道。本实验采用新的展开系统可以更好地鉴别不 同来源苍耳子,并首次进行了苍耳子中有效成分之 一2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱采用 Zorbax C】8(250 mill×4.6 mm,5 Ixm),流动相为乙 绿原酸的含量测定研究,对苍耳子药材的质量控 制具有重要意义。 腈-0.4%磷酸溶液(10:90),流速:1.0 mL/分钟,检 测波长327 nm(参考文献 )。进样量10 Ixl;柱温 1仪器与试药 高效液相色谱仪:Agilent1200四元低压梯度泵 系列,Agilent化学工作站,二级管阵列检测器。 绿原酸对照品(批号:1 10736—200422,供含量测 为室温。理论塔板数按绿原酸峰计算,应不低于3 000,对照品与样品的色谱图见图1。 2.2.2对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照 定用)及苍耳子对照药材(批号:121168-200503)购 于中国药品生物制品检定所。 品适量,置棕色瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含70 g的溶液,即得。 2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末0.5 g,精 —乙腈为色谱纯,水为超纯水,其它试剂均为分析 纯。 密称定,置圆底烧瓶中,精密加入50%甲醇25 mL, 苍耳子药材由江西中医学院褚小兰教授鉴定。 2方法与结果 称定重量,回流提取3O分钟,放冷,再称定重量,加 50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即 得。 2.1薄层鉴别取苍耳子粉末1 g,加甲醇30 mL, 加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,加甲醇1 mL使 2.2.4 线性关系考察 精密称取绿原酸对照品 17.76 mg置25 mL量瓶中,加50%甲醇使溶解,并 稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取上述 对照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0 mL,分别置25 mL 溶解,作为供试品溶液。另取苍耳子对照药材,同法 制成对照药材溶液。取绿原酸对照品,加甲醇制成 每1 mL含l mg的溶液。照薄层色谱法(中国药典 通讯作者:付小梅,Tel:(0791)7118983,E—mail:smilefxm@163.conr ・62・ 江西中医药2011年4月第4期总42卷第340期 按2.2.3项下方法制备供试品溶液,进样分析,测定 A 结果见表2。 表2苍耳子中绿原酸含量测定结果 L t/rain 图1苍耳子药材含量测定HPLC图 A对照品B样品1绿原酸 量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸 3讨论 取上述各溶液10 l注人液相色谱仪分析。以进样 2005年版药典(一部),苍耳子药材的TLC鉴 量( g)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线 别方法不能很好区别不同种来源苍耳子,且采用正 并进行回归分析,得回归方程:Y=3025.1X一 丁醇展开系统,展开时间过长,本实验所采用展开条 12.391,r=0.999 9。结果表明:绿原酸在0.142 1— 件可以弥补这些缺点。 3.552 0 I.Lg范围内,线性关系良好。 提取条件的确定。实验中比较了超声和回流两 2.2.5精密度试验精密吸取绿原酸对照品溶液 种常用方便的提取方法,回流提取法明显好于超声 10 L,重复进样测定6次,记录峰面积,RSD= 法;对30%、50%甲醇、70%甲醇、95%甲醇作为提 0.07%,表明仪器精密度良好。 取溶剂进行考察,50%甲醇优于其他提取溶剂;对 2.2.6 稳定性试验取供试品溶液,分别在0、2、 10、25、50 mL三个提取溶剂体积进行考察,25 mL 4、6、8、10、12、14小时测定,记录峰面积,其RSD= 50%甲醇可以提取完全;比较了提取15、30、45、60 1.06%,表明供试品溶液在l4小时内,基本稳定。 分钟的差别,提取30分钟即可将绿原酸提取完全。 2.2.7重复性试验精密称取6份同一批药材(批 苍耳原植物在全国广为分布,苍耳子药材也多 号:20051026)粉末0.5 g,同2.2.3项下方法制备供 为各地自产自销,但不同产地苍耳子有效成分的含 试品溶液,进样分析,计算绿原酸含量,其含量的 量差异也较大。本实验建立了苍耳子药材中绿原酸 RSD=1.4%。 的含量测定方法,可为苍耳子药材质量标准的提高 2.2.8 回收率试验取本品(批号:20051026,含量 提供参考。 据作者调查,目前苍耳子药材品种较为混乱,尤 3.613 5 mr/g)约0.25 g,精密称定,各精密加入绿 其是蒙古苍耳子应用也较为广泛。对两种来源苍耳 原酸对照品溶液(0.036 22 mg/mL)25 mL,同2.2.3 子的含量测定结果显示,蒙古苍耳子中绿原酸的含 项下方法制备供试品溶液,进样分析,由测得量与加 量要普遍高于苍耳子,建议对其进行安全性评价以 人量计算回收率,结果见表1,表明方法回收率良 好。 明确是否可以替代苍耳子入药。 参考文献 表1 绿原酸回收率试验结果 /mg [1]国家药典委员会.中国药典(一部)[s].北京:化学工业出版社, 取样量 (g) 样品中堡原酸的量 绿原酸加入量 绿原酸测得量 回收率(2005:111,152. %) 平均回收率 RSD (%) (%) o.2555 0.9232 0.9055 1.8261 99.71 [2]吴卫华,康桢,欧阳冬生,等.绿原酸的药理学研究进展[J].天 O.2483 0.89"/2 0.9055 1.8012 99.83 然产物研究与开发,2006,18:691—694. o.2538 0.9171 0.9055 1.8249 100.25 99.86 0 5 0.2527 0.9131 0.9055 1.8224 100.42 (收稿日期:2Ol1-02.14责任编辑:曾文雪) O.2549 0.92ll 0.9055 1.8184 99 09 2.2.9样品测定对采集或购买到的苍耳子药材 ・63-