第２４卷第４期 ２０１２年７月 肝胆胰外科杂志 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｔｏｂｉｌｉａｒｙ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｖｏ１．２４ Ｎｏ．４ Ｊｕ１．２０１２ ・实验研究・ ＴＧＦ Ｂ，对脓毒症大鼠肝脏Ｍ Ｄ ２表达的影响 李楠，张或，邢静，方晓君 （大连医科大学第一附属医院急诊科，辽宁大连１１６０１１） 『摘要１目的建立大鼠脓毒症模型，观察不同时间点大鼠肝脏髓样分化蛋白２（Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ一 ２，ＭＤ２）表达情况和ＮＦ—Ｋ Ｂ含量动态变化，并给予外源性ＴＧＦ Ｂ 干预，探讨ＴＧＦ Ｂ 对大鼠脓 毒症的作用及可能机制，为Ｉ临床脓毒症的治疗提供思路。方法健康雄性ＣＬ级ＳＤ大鼠１２０只随机分为三 组：对照组４Ｏ只，脓毒症模型组４０只，ＴＧＦ Ｂ，干预组４０只。按２ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ时间 点活杀大鼠取肝脏．ＨＥ染色光镜观察肝脏组织形态改变；用ＥＬＩＳＡ法检测肝脏组织匀浆上清液ＮＦ－Ｋ Ｂ 含量；１ＬＴ—ＰＣＲ法检测肝脏ＭＤ２ ｍＲＮＡ的表达。结果模型组较对照组组织损伤严重，炎症细胞浸润 多，伴有出血；ＴＧＦ Ｂ，组较对照组仍有炎细胞浸润，但较模型组炎症细胞浸润减少，损伤减轻；ＮＦ— Ｋ Ｂ在模型组（６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ）较对照组合量明显增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）， 并且在２４ ｈ达到最高，４８ ｈ进入平台期。ＴＧＦ Ｂ，组（６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ）较模型组含量减少，差异 有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；ＭＤ２ ｍＲＮＡ在在模型组（６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ）较对照组表达明 显增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），并且在２４ ｈ表达达到最高，４８ ｈ进入平台期；ＴＧＦ Ｂ．组（１２ ｈ、 ２４ ｈ）与模型组比较表达减少，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５ ｏ结论ＭＤ２ ｍＲＮＡ脓毒症时表达明 显增加，提示ＬＰＳ信号转导增强。ＴＧＦ Ｂ．可能通过抑制ＬＰＳ的信号转导，减轻炎症反应。 『关键词１ 脓毒症；转化生长因子Ｂ，；髓样分化蛋白；核因子Ｋａｐｐａ Ｂ；内毒素；大鼠 『中图分类号１ Ｒ９７５＋．５ 『文献标识码１ Ａ ｆ文章编号１ １００７—１９５４（２０１２）一０３０１・０４ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ＴＧＦ Ｂ ｌ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ＭＤ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ ｒａｔｓ ＬＩ Ｎａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙｕ，ＸＩＮＧＪｉｎｇ，ｅｔａＬ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｉＥｍｅｒｇｅｎｃｖ，ｔｈｅ ＦｉｒｓｔＡｔｔｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｔＤａｈ＇ａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｍ＇ｖｅｒｓｉｔｖ，Ｄａｌｉａｎ， Ｌｉａｏｎｉｎｇ１１６０１１，Ｃｈｉｎａ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ，ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ ｍｖｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ一２（ＭＤ２１ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＮＦ—ｋ Ｂ ａｎｄ ｇｉｖｅ ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ ＴＧＦ Ｂ， ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ，ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ＴＧＦ Ｂ ｉｎ ｒａｔ ｓｅｐｓｉｓ ｍｏｄｅ１ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｔｗｅｎｔｙ ｈｅａｌｔｈｙ ｍａｌｅ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｓｈａｍ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｓｅｐｓｉｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ＴＧＦ Ｂ，ｔｒｅａｔｅｄ ｇｒｏｕｐ（ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ４０ ｒａｔｓ）．Ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｓａｃｒｉｆｉｃｅｄ ａｔ ２ ｈ，６ ｈ，１２ ｈ，２４ ｈ ａｎｄ ４８ ｈ ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｗａｓ ｔａｋｅｎ ｏｕｔ．Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｓｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ＨＥ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＮＫ—Ｋ Ｂ ｉｎ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ＭＤ２ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＲＴ—ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｅｖｅｒｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌ ｗａｓ ｍｕｃｈ ｍｏｒｅ ａｎｄ ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ ｗｉｔｈ ｂｌｅｅｄｉｎｇ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｔｉｌｌ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌ ｉｎ ｔｈｅ ＴＧＦ Ｂ，ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄａｍａｇｅ ｗａｓ ｍｉｌｄｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＮＦ—Ｋ Ｂ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（６ ｈ，１２ ｈ，２４ ｈ ａｎｄ ４８ ｈ）ｗａｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｎｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｔ ２４ ｈｏｕｒ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，４８ ｈｏｕｒ ｗａｓ ａｒｒｉｖｅｄ ｔｈｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｓｔａｇｅ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｔ ５ ｈ，１ ２ ｈ ａｎｄ ２４ ｈ ｏｆ ｔｈｅ ＴＧＦ Ｂ ｗａｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｈａｄ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｆＰ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤ２ ｍＲＮＡ ａｔ ６ ｈ，１２ ｈ，２４ ｈ ａｎｄ ４８ ｈ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｎｅ．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒＪｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｔ ｔｈｅ ２４ ｈ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，ｔｈｏｓｅ ａｔ ｔｈｅ ４８ ｈ ｅｎｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｓｔａｇｅ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｔ １ ２ ｈ ａｎｄ ２４ ｈ ｉｎ ＴＧＦ Ｂ ｗａｓ ｒｅｄｕｃｅｄ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｎ ｓｅｐｔｉｃ 收稿日期：２０１２—０３－１５ 基金项目：辽宁省教育厅高等学校科研项目（２００９Ａ２０５ ｏ 作者简介：李楠（１ ９７５－），女，辽宁大连人，副教授，博士生。 ３０１—— 第２４卷 肝胆胰外科杂志 第４期 ｍｏｄｅｌ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＤ２ ｉｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ＬＰＳ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｆｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｄ．ＴＧＦ ８ ｍａｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ＬＰＳ，ｒｅｄｕｃｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅａｃｔｉｏｎ． ＩｌｌＩｌｌ衄ｓｅｐｓｉｓ；ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒ。ｗｔｈ ｆａｃｔ。ｒ Ｂ，（ＴＧＦ Ｂ ）；ｍｙｅｌ。ｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ１ ｐｒ。ｔｅｉｎ一２（ＭＤ２）； ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ Ｋａｐｐａ Ｂ ｆＮＦ Ｋ Ｂ）；ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；ｒａｔｓ 脓毒症（ｓｅｐｓｉＳ）发生率高，病情凶险，病死率 高。特别是由其导致的脓毒性休克（ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ）及 多器官功能障碍综合征（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ 于离心管中，一８０℃冰箱保存。 １．２ ＭＤ２ ｍＲＮＡ测定 逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）法。肝脏组 织的裂解，肝脏组织总ＲＮＡ的提取，ｃＤＮＡ第一链合 成（逆转录ＲＴ）及ＰＣＲ扩增，ＲＴ－ＰＣＲ产物凝胶电 泳分析。 １．３ ＮＦ—Ｋ Ｂ检测 ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＭＯＤＳ）已成为危重患者的主要死亡原因 之一。目前认为，由脂多糖（１ｉｐ叩ｏｌｖｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ） 介导的Ｔｏｌｌ样受体４（Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４，ＴＬＲ４）／ 髓样分化蛋白２（ｍｙｅｌｏｉｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ２， ＭＤ２）信号通路参与脓毒症的发生。其主要的信号分 子通过核因子Ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦ－Ｋ Ｂ）、丝裂原活化 蛋白激酶（ＭＡＰＫ）、磷脂酰肌醇（ＰＩ３Ｋ）活化产生， 并使机体产生免疫应答”］。ＮＦ—Ｋ Ｂ的活化促进各种 炎症因子的释放，产生炎症瀑布效应，使全身炎症反 应失控 １，发展成ＳＩＲＳ，甚至ＭＯＤＳ。许多研究表 明转化生长因子１３（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｂ，ＴＧＦ Ｂ）参与调节脓毒症炎症反应，减少前炎症因子释 ＥＬＩＳＡ法。 １．４肝脏组织形态 光镜下观察。 １．５统计学方法 ＣｕｒｖｅＥｘｐｅｒｔ １＿３软件拟合ＥＬＩＳＡ标准曲线，并计 算回归方程，统计各孔浓度。统计分析应用ＳＰＳＳ１１．０ 统计软件包进行，各组数据均以ｆ ±ｓ）表示。多组均 数比较采用单因素方差分析（Ｏｎｅ—ｗａｖ ＡＮＯＶＡ），各 组间两两比较采用成组设计的两样本均数检验 （Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｓａｍｐｌｅ Ｔ—ｔｅｓｔ ｏ采用ＳＰＳＳ １ １．０统计软件 放，对机体有抗炎症反应过度的作用 １。病理状态 下，肠道中存在的大量革兰氏阴性菌产生内毒素可对 机体造成损害。而肝脏是清除内毒素的重要器官，也 是首先遭到攻击的器官。本实验通过大鼠盲肠结扎穿 孑Ｌ（ＣＬＰ）制备脓毒症模型Ｉ引，测定不同时间点脓 毒症大鼠ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达情况，观察肝脏ＴＬＲ４／ 分析，Ｊｐ＜Ｏ．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１肝脏病理切片观察 ＭＤ２信号通路活化情况，及下游主要活化底物ＮＦ— Ｋ Ｂ的含量，同时给予外源性ＴＧＦ Ｂ 干预，探讨 ＴＧＦ １３．在脓毒症的信号传导通路中的作用及可能机 制，以期为临床治疗脓毒症提供思路和策略。 １对象和方法 １．１ 动物分组与模型复制 对照组大鼠各时间点肝脏组织结构未见明显异 常；模型组较对照组组织损伤严重，炎症细胞浸润 多，伴有出血改变。ＴＧＦ １３，组病理改变明显减轻， 仍与正常组有差别。较模型组炎症细胞浸润减少，损 伤减轻。 ２．２ ＮＰ－ＫＢ检测结果 表１列出了肝脏中ＮＦ—Ｋ Ｂ在不同组不同时间点 健康雄性ＣＬ级ＳＤ大鼠１２０只，体重２２０～２５０ ｇ， 随机编号分为３组。对照组（假手术组）４０只：腹正 的含量，其中对照组各时间点之间方差分析无差异 （１９＞０．０５），ＮＦ—ＫＢ含量无明显变化。模型组肝脏 组织中ＮＦ—ＫＢ的浓度从６ ｈ起较对照的浓度明显增 中线做２ ｃｍ的切口暴露盲肠，翻动后还纳、关腹。模 型组（脓毒症模型组）４０只：建立盲肠结扎穿孔模型 （ＣＬＰ模型），于ＣＬＰ模型后０．５ ｈ尾静脉注射生理盐 水１ ｍＬ／２５０ ｇ。ＴＧＦ ８，组（ＴＧＦ Ｂ 干预组）４０ 只：建立盲肠结扎穿孔模型（ＣＬＰ模型），于ＣＬＰ模 型后０．５ ｈ尾静脉注射ＴＧＦ １３ １２０ ｎｇ／ｍＬ／２５０ ｇ。各 组在造膜或假手术后２ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ ５ 加，并在２４ ｈ达到最高，４８ ｈ进入平台期，２４ ｈ与 ４８ ｈ之间无明显差异（１９＞０．０５）。对照组与模型组 肝脏组织中ＮＦ—Ｋ Ｂ的浓度比较，在６ ｈ、１ ２ ｈ、 ２４ ｈ、４８ ｈ时间点含量增加，差异有统计学意义（尸 ＜Ｏ．Ｏ５ ｏ ＴＧＦ １３，组与模型组ＮＦ—Ｋ Ｂ的浓度检测结 果比较，在６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ时间点含量减少，差异 有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 个时间点各随机活杀５只大鼠，无菌条件取肝脏存放 一３０２一 注：ＴＧＦ Ｂ 组与模型组同一间点ＮＦ－Ｋ Ｂ浓度比较， 尸＜Ｏ０５；模型组与对照组同一间点ＮＦ— Ｂ浓度比较， Ｐ＜Ｏ．０５ ２．３ ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达水平结果 表２列出了肝脏中ＭＤ２ ｍＲＮＡ在不同组不同时 问点的表达水平，其中对照组有少量表达，各时间点 之间方差分析无差异（尸＞０．０５），ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达 与４８ ｈ之间无差异（Ｐ＞０．０５）。在６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、 ４８ ｈ时间点模型组较对照组ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达水平增 加，差异有统计学意义（ＪＤ＜０．０５）。与模型组比较， ＴＧＦ １３ 组在１２ ｈ、２４ ｈ时间点ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达水平 水平无明显变化。模型组在６ ｈ表达开始明显增 加，并在２４ ｈ达到最高，４８ ｈ进入平台期，２４ ｈ 表２各组不同时间点ＭＤ２ ｍＲＮＡ平均光密度比值 ±ｓ） 下降，差异有统计学意义，２ ｈ、６ｈ、４８ ｈ组之间ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达水平无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。 滓：ＴＧＦ Ｂ，组与模型组同 时间点ＭＤ２ｍＲＮＡ表达水平比较， 足００５；模型组与对照组同一间点ＭＤ２ｍＲＮＡ表达水平比较， Ｐ＜Ｏ．０５ ３讨论 本实验通过建立大鼠ＣＬＰ脓毒症模型，观察脓 毒症状态下ＭＤ２ ｍＲＮＡ、ＮＦ—Ｋ Ｂ的动态表达情况； 同时给予外源性ＴＧＦ Ｂ 干预，以ＭＤ２ ｍＲＮＡ、ＮＦ－ 脓毒症是当前临床医师所面临的棘手难题，是 危重患者的主要死亡原因之一。近年来，对感染和脓 毒症的研究已成为危重病医学中十分活跃的领域之 一Ｋ Ｂ及组织病理为观察指标，探讨ＴＧＦ ｐ 对脓毒 症的作用及可能机制。从病理切片可以看出，模型组 比对照组炎症细胞浸润明显，伴有出血，组织损伤 。近年来对细菌感染，机体免疫反应和脓毒症三者 之间“交互对话”的认识主要从信号转导途径人手。 细菌／ＬＰＳ的刺激后，ＴＬＲ４／ＭＤ２受体复合物接收该信 号刺激，引起下游炎症介质释放，也启动了抗炎系 统。１９９９年Ｓｈｉｍａｚｕ等 ｌ最先报道了ＭＤ２的氨基酸序 重。ＴＧＦ Ｂ 组也有炎症细胞浸润，但是炎症细胞数 目少，浸润较轻。进一步的检测表明，对照组有少量 的ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达，而且方差分析结果显示各个时 列。他们发现ＭＤ２ ｎ…ｖ，与ＴＬＲ４结合，锚定于细胞表面， 形成同源二聚体或更大的复合体，从而提供多个 ＴＬＲ４结合位点，易化ＴＬＲ４的铰链反应，由此导致了 更强的ＮＦ—Ｋ Ｂ激活。Ｐｕｇｉｎ等 １发现，严重脓毒症 及脓毒症休克患者血浆（而不是正常血浆）对表达 ＴＬＲ４的上皮细胞的ＬＰＳ激活具有支持作用。正常血 问点之间没有差异，说明正常情况下即有少量的 ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达。模型组ＭＤ２ ｍＲＮＡ的表达２ ｈ就 开始增加，６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ组均与对照组有差 异。其在２４ ｈ组达到高峰，４８ ｈ组与２４ ｈ组没有差 异，认为ＭＤ２ ｍＲＮＡ的表达达到平台期。由于模型 组４８ ｈ大鼠死亡率高达１００％，是否存在表达下降时 相（如７２ ｈ，９６ ｈ），本实验中未能测得。 浆中加入重组可溶性髓样分化蛋白２（ｓＭＤ２），对上 皮细胞的ＬＰＳ激活有允许作用，激活水平与脓毒症血 浆相当；可溶性ｓＭＤ２缺失血浆则无此效应。因此认 本实验结果提示ＴＧＦ Ｂ 可能具有抑制炎症反应 的生物学作用，检测ＭＤ２ ｍＲＮＡ的表达情况，在１２ ｈ、 ２４ ｈ组与模型组有差异（Ｐ＜０．０５），但是２ ｈ、６ ｈ组没有统计学差异（尸＞０．０５），提示ＴＣＦ １３，有一定 为ＭＤ２的基本功能就是与ＴＬＲ４的胞外区结合，赋予 ＴＬＲ４对ＬＰＳ的反应性。ＴＧＦ １３是目前经研究证实具 有免疫抑制功能的细胞因子，在先天性及获得性免疫 的起效时间，其具体机制目前还不清楚，需进一步深 入研究。ＴＧＦ Ｂ 组１２ ｈ、２４ ｈ时间点的ＭＤ２ ｍＲＮＡ 中都发挥重要的作用 １。Ａｈｍａｄ等 的研究发现，发 生脓毒症时，ＴＧＦ １３在脾巨噬细胞产生，并以旁分泌 的方式作用于Ｔ细胞，通过抑制ＩＬ一２ ｍＲＮＡ表达， 减少ＩＬ一２的产生。 一表达水平下降，而４８ ｈ却没有继续下降。部分研究 指出ＴＧＦ Ｂ 可能参与促炎症反应过程。Ｗａｎｇ等 研究发现角质细胞过表达ＴＧＦ Ｂ 时导致伤口愈合延 ３０３一 第２４卷 肝胆胰外科杂志 第４期 迟。Ｇａｒｃｉａ—Ｌａｚａｒｏ ＪＦ等 ｌＯｌ研究发现在大鼠ｃ反应蛋 白启动子下游表达活性ＴＧＦ Ｂ 基因，得到不同表 参考文献 Ｃｏｓｋｕｎ ＡＫ，Ｙｉｇｉｔｅｒ Ｍ，Ｏｒａｌ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ ｏｎ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ，ｌｉｖｅｒ，ｌｕｎｇｓ，ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙｓ ｉｎ ａ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｃｅｃａｌ 达水平的ＴＧＦ １３ ，发现ＴＧＦ ｐ．过表达能增加ＬＰＳ 诱导的前炎症因子生成，呈剂量依赖性的使实验大 ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｎｃｔｕｒｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＷｏｒｌｄ— Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１ １，７（１ １）：１３４１—１３５６． 『２１ 鼠更容易进展为脓毒症休克。本实验中４８ ｈ组ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达没有下降是否与ＴＧＦ Ｂ．的远期促炎反应 有关，还需进一步研究。 ＮＦ—Ｋ Ｂ是多种促炎症基因高度转录的必需因 庄永敬，曹云飞，吴桂荣，等．缺血预处理对大鼠肝脏缺血／再 灌注早期核因子Ｋ Ｂ活性及细胞凋亡的影响…．肝胆胰外科 杂志，２００９，２１（６）：４３１－４３４． 『３１ Ｗｈｉｔｅ Ｍ，Ｌａｗｌｅｓｓ ＭＷ，Ｏ’Ｄｗｙｅｒ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ 子，也是ＬＰＳ／ＴＬＲ４／ＭＤ２信号通路下游重要的激活 底物。本组研究检测ＮＦ—Ｋ Ｂ结果表明ＴＧＦ Ｂ 组在 ６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ与相应时间点的模型组有差异，说 １ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ—ｌ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ７ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２０ｌ０，５０（３）：３２２—３２７． 明ＴＧＦ １３．可以通过抑制ＴＬＲ４／ＭＤ２信号通路，进 而抑制ＮＦ—Ｋ Ｂ的活化，进一步抑制各种炎症因子 的释放，发挥其抗炎症作用。与４８ ｈ组ＭＤ２ ｍＲＮＡ 表达无差异一样，ＮＦ—Ｋ Ｂ在ＴＧＦ Ｂ 组４８ ｈ时间点 与模型组也无统计学差异（Ｐ＞０．０５），而且４８ ｈ组 【６］ 『５１ 张萌，蒋龙元，周天恩，等．脓毒症大鼠肠黏膜免疫屏障功能 的变化叭中华急诊医学杂志，２０１０，１９（３）：２６４—２６８． Ｓｈｉｍａｚｕ Ｒ，Ａｋａｓｈｉ Ｓ，Ｏｇａｔａ Ｈ，ｅｔ ａ１．ＭＤ２，ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｔｈａｔ ｃｏｎｆｅｒｓ ｌｉｐｏｐｏｌｙ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｒｅｓｐｏｎ ｓｉｖｅｎｅｓｓ ｏｎ Ｔｏｌｌ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｍｅｄ，１９９９，１８９（１１）：１７７７—１７８２． Ｐｕｇｉｎ Ｊ，Ｓｔｅｒｎ－Ｖｏｅｆｆｒａｙ Ｓ，Ｄａｕｂｅｕｆ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｓｏｌｕｂｌｅ ＭＤ２ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｐｓｉｓ ａｎｄ ｓｅｐｔｉｃ 死亡率高达１００％，说明ＴＧＦ Ｂ 的抗炎作用有限， 尤其是远期抗炎效应。 综上所述，ＭＤ２ ｍＲＮＡ在正常生理条件下可少 ｓｈｏｃｋ［Ｊ】．Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０４（１ ３）：４０７１—４０７９． ｔｙｎｎ Ｋ，Ｔｏｋ Ｄ，Ｖａｔａｎｓｅｖｅｒ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｌｅｖｏｓｉｍｅｎｄａｎ ［７］ Ｅｒｂｔｕｐ・－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ・－ｂｅｔａ ａｎｄ ｓｍａｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ａｏｒｔａ ｉｎ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｕｌｕｓ Ｔｒａｖｍａ Ａｃｉｌ Ｃｅｒｒａｈｉ Ｄｅｒｇ，２０１０，１６（４）：２９３—２９９． 量表达，脓毒症时表达明显增加，提示ＬＰＳ信号转导 增强。脓毒症大鼠模型组ＮＦ—Ｋ Ｂ含量增加，提示 炎症介质释放增加，炎症反应失控。外源性应用ＴＧＦ Ｂ，后，使脓毒症大鼠肝脏ＭＤ２ ｍＲＮＡ表达减少， ＮＦ—Ｋ Ｂ含量减少，提示ＴＧＦ Ｂ．可能通过抑制ＬＰＳ 的信号转导，减轻炎症反应。但是ＴＧＦ Ｂ 的抗炎症 ［８］ Ａｈｍａｄ Ｓ，Ｃｈｏｕｄｈｒｙ ＭＡ，Ｓｈａｎｋａｒ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ—Ｂ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，１９９７，４０２（３）：２１３－２１８． ［９］ Ｗａｎｇ ＸＪ，Ｈａｎ Ｇ，Ｏｗｅｎｓ Ｐ＇ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＴＧＦ ｂｅｔａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｓｙｍｐ Ｐｒｏｃ，２００６，１ １（１）：１ １２－１ １７ ［１０］ Ｇａｒｃｉａ—Ｌａｚａｒｏ ＪＦ，Ｔｈｉｅｒｉｎｇｅｒ Ｆ，Ｌｕｔｈ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｈｅｐａｔｉｃ ｏｖｅｒ— ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－－ｂｅｔａ １ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ＬＰＳ－・ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ 作用有限。ＴＧＦ Ｂ 可为临床治疗脓毒症提供重要的 思路及理论依据。 ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｙ ｌｉｖｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉｃ ｓｈｏｃｋ［Ｊ］ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ，２００５，１０１（２）：２１７—２２２． （本文编辑：鲁翠涛，毛文明） （上接第３００页） ＰＥＰＣＫ ｍＲＮＡ的过度表达，进而抑制糖异生过度增 强，以达到控制血糖浓度的目的。由于梗阻性黄疸 时，影响血糖的因素众多且发生机制复杂，仍需进 一 Ｋ，Ｙａｍａｓｈｉｔａ Ａ，Ｍｕｔｏｈ Ｋ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ 【３］ Ｔａｎｉｇｕｃｈｉｔｈｅ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ａｎｄ ｅｘｏｃｒｉｎｅ ｐａｎｃｒｅａｓ ｏｆ ｒａｔｓ ａｆｔｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｊａｕｎｄｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，２０１ｌ，７３（２）：１６ｌ一１６８． ｏｎ ＤＳ，Ｒａｍｎａｎａｎ ＣＪ，Ｇｒｕｅｔｅｒ ＣＡ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ［４］ Ｅｄｇｅｒｔｏｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ｇｌｕｃＯｎｅＯｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｖｉｖｏ 步研究其分子机制。 ［５］ ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００９，５８（１２）：２７６６—２７７５． 参考文献 Ｉｓａｋｓｓｏｎ Ｂ，Ｒｉｐｐｅ Ｃ，Ｓｉｍｏｎｏｓｋａ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｊａｕｎｄｉｃｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｉｖｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ２ Ｉｎｏｕｅ Ｈ，Ｏｇａｗａ Ａｓａｋａｗａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｃ ＳＴＡＴ３ ｉｎ ｂｒａｉｎ－ｉｎｓｕｌｉｎ ａｃｔｉｏｎ ｏｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｇｌｕｃｏｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ【Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ，２００６，３（４）：２６７—２７５． 『６］ 罗海峰．梗阻性黄疸对各脏器功能的影响及其防治…．中国 医刊，２０１ ｌ，４６ｆ４１：１１—１５． ａｎｄ ｉｎｔａｃｔ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ［Ｊ］． Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００２，３７（１）：１０４—１ ｌ １． ［２］ 刘文生，吴德全，杨书龙，等．精氨酸对梗阻性黄疸大鼠肝损 伤的保护作用及其对肝细胞凋亡的影响ｆＪ１．肝胆胰外科杂志， ２００９，２ １（６）：４３９—４４７． 谭广，王忠裕．梗阻性黄疸的围手术期处理Ⅲ．中国医刊，２０１１， ４６ｆ４１：２４—２７． 『８１ ３０４一 朱维铭，王萌．恶性梗阻性黄疸并发糖尿病围手术期处理…． 中国实用外科杂志，２００７，２３（１０）：７９６－７９８． （本文编辑：鲁翠涛，毛文明）
