TSQ Quantum液质联用仪操作速成手册本操作速成手册适用于Thermo Fisher Scientific TSQ Quantum液质联用仪(包括Surveyor AS自动进样器, Surveyor LC Pump, Surveyor MS Pump, AccelaPump溶剂输送泵, TSQ Quantum系列三级四极杆质谱仪及其工作站) 在定量分析时的使用方法。欲了解更多信息，请参阅仪器说明书及相关培训材料。如系统连接其它品牌液相色谱系统，请参阅相关说明书。本操作速成手册主要包括以下内容：操作任务Step 1. LC-ESI/MS/MS分析方法建立Step 1.1 化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立Step 1.2 化合物LC/MS/MS方法建立Step 2. 样品序列建立及样品分析Step 3. 定量数据处理Step 3.1 定量数据处理方法建立Step 3.2 定量数据处理及定量结果浏览Step 4. 样品报告生成开机方法，关机方法页码第1页第1页第1页第2页第2页第2页第3页第4页第4页Step 1. LC-ESI/MS/MS分析方法建立Step 1.1 化合物ESI/MS/MS质谱条件优化建立图标，打开Quantum Tune Master 界面；2. 在Tune Master 中界面上，选择菜单Workspace, 选择Compound Optimization Workspace 按钮，显示Compound Optimization 工作界面;3. 设置优化参数:A. 选择Optimization Modes (优化模式): MS Only按钮;B. 在Optimization Mass 列表中，输入母离子质量数;C. 在优化参数列表中，选择(9) 优化的参数(Spray Voltage, Sheath gas pressure, Aux gas pressure, Tube lens offset, Skimmer offset);D. 单击Start 按钮，开始优化; 优化结束后, 选择Accept按钮;E. 选择Optimization Modes (优化模式):MS+MS/MS按钮;F. 在Optimization Mass 列表Num product 列中，输入子离子个数(1~8);G. 在优化参数列表中, 选择(9) 优化的参数(Collision energy);H. 单击Start 按钮, 开始优化; 优化结束后, 选择Accept按钮;I. 参数优化完成, 保存质谱方法: 选择Save tune as 按钮, 选择保存位置, 输入文件名称, 保存质谱方法(.TSQTune文件);J. 单击定义扫描模式Define scan 快捷图标, 在扫描模式区单击鼠标右键, 选择Copy scan event.1. 双击桌面A. 优化模式MS OnlyE. 优化模式MS+MS/MSC, G. 优化参数列表D, H. Start按钮(优化结束后变为Accept按钮)B. Optimization Mass列表J. 扫描模式Define scanI. 保存质谱方法Save tune asF. Num product列Step 1.2 化合物LC/MS/MS方法建立1. 双击桌面上Xcalibur快捷图标, 打开Xcalibur工作站;2. 在XcaliburRoadmap 主页上, 点击Instrument Setup按钮, 建立LC/MS/MS方法;3. 设置液相色谱部分参数:A. Surveyor 液相泵的参数设置:1) 点击Instrument Setup窗口中Surveyor (Accela) pump图标; 2) 输入A,B,C,D流动相名称，Column Description(色谱柱标注);3) 设置流动相条件(流动相比例, 流速等).B. Surveyor自动进样器参数设置:1) 点击Instrument Setup窗口中的Surveyor (Accela) AS图标; 2) 输入Wash Volume (如400 μl), Flush Volume (如400 μl);4. 设置质谱部分(TSQ Quantum)参数:1) 点击Instrument Setup窗口中的TSQ Quantum图标;2) 单击Pastescan event按钮.5. LC/MS/MS方法保存: 单击File菜单, 选择Save As, 选择保存路径并输入文件名称, 保存方法(. Meth文件).2. XcaliburRoadmap主页2. Instrument Setup按钮, LC/MS/MS方法建立2. Sequence Setup按钮, 建立样品序列3.A. Surveyor (Accela) pump图标4. TSQ Quantum图标3.B. Surveyor (Accela) AS图标第1页3. 洗脱方法3. A,B,C,D流动相溶剂名称4. Paste Copy EventStep 2. 样品序列建立及样品分析1. 在XcaliburRoadmap 主页上, 点击Sequence Setup按钮, 建立样品序列;2. 序列建立:A. 选择样品类型Sample Type: Unknown, QC, Blank, Std Bracket.B. 输入文件名称File Name: 可以手动输入, 也可点击鼠标右键浏览, 选择已经存在的文件的文件名; C. 设定文件保存路径Path: 双击鼠标左键(或者点击鼠标右键, 选择
,设定文件保存路径;D. 选择分析方法Inst Meth: 双击鼠标左键(或者点击鼠标右键, 选择, 打开Step1.2中所建立的分析方法;E. 设定样品瓶在进样器中的位置Position: A:1-A:40, B:1-B:40, C:1-C:40, D:1-D:40. E:1-E:40;F. 输入进样体积;G. 保存序列: 单击File菜单, 选择Save As, 选择保存路径并输入序列文件名称, 保存序列(. Sld文件)。3. 样品分析:A. 运行单个样品: 在Sequence序列表中鼠标点击选择需要运行的样品，单击按钮, 在出现的界面中输入操作人员姓名User, 设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On, 仪器仍在扫描状态, Standby,仪器处在待机状态, Off, 仪器关机), 单击OK, 开始进样分析;B. 运行多个样品: 单击按钮, 在出现的界面中, 输入操作人员姓名User, 在Run Rows空格中输入要运行的样品范围(在序列表中的行标, 如1－6),设定样品运行结束后仪器状态After Sequence Set System (On, 仪器仍在扫描状态, Standby,仪器处在待机状态, Off, 仪器关机), 单击OK, 开始进样分析.4. 样品运行时可将界面切换到实时监测界面: 点击按钮进行界面切换.1. XcaliburRoadmap主页2. Sequence Setup按钮, 建立样品序列3.A. 运行单个样品3.B. 运行多个样品2.A. 样品类型2.F. 进样体积2.E. 样品位置2.B. 文件名称2.D. 分析方法2.C. 文件保存路径4. 切换到实时监测界面3.A. 操作人员姓名User3.B. 运行多个样品的范围(输入序列行标范围)3.B. 设定样品运行结束后仪器状态Step 3. 定量数据处理Step 3.1 定量数据处理方法建立1. 在XcaliburRoadmap 主页上, 点击Processing Setup 按钮, 建立定量数据处理方法;2. 设置定量方法:A. 定义色谱方法: 单击Option菜单, 单击Chromatography by, 选择液相色谱方法LC, 点击OK;B.定义定量方法(内标法,外标法): 单击Option菜单, 单击Calibration by, 选择定量方法(内标法, Internal Standard, 外标法External Standard), 点击OK; C. 打开一演示数据文件: 单击File菜单,选择Open Raw File, 打开一原始数据文件(在要作定量处理的数据中选择一个,最好是打开一个标样的数据文件);1. XcaliburRoadmap主页1. Processing Setup按钮, 建立定量数据处理方法4. 定量结果浏览2. Option菜单2.A. 定义色谱方法2.A. LC2.B. 内标法2.B. 定义定量方法第2页2.B. 外标法3. 设置定量方法(内标法)参数:A. 定量组分的识别Identification参数: 设定定量组分的名称Name (下拉菜单中选择New, 直接输入该组分名称), 扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法), 点击OK, 输入保留时间Retention time, 点击OK (如果是多组分定量, 点击Name栏内下拉菜单, 选择NEW, 输入第二个组分名称, 其他参数设定相同). B. 内标物的识别Identification参数: 在Name 下拉菜单中选择New, 直接输入内标物名称, 扫描方法Filter (下拉菜单中选择内标物对应的扫描方法), 点击OK, 输入内标物保留时间Retention time, 点击OK;C. 内标物积分参数设定Detection: 单击Detection缺省菜单, 输入内标物各积分参数, 点击OK;D. 定量组分积分参数设定Detection: 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称, 输入该组分各积分参数, 点击OK;E. 校正曲线Calibration 参数设定: 单击Calibration 缺省菜单;F. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内内标物的名称, 定义其为内标物: 在组分类型Component type 栏内选择ISTD, 点击OK;G. 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称, 在Target compounds 栏内, ISTD的下拉菜单中选中内标物, 点击OK;H. 标准溶液浓度Levels 设定: 单击Level 缺省菜单,在左侧浓度列表内, Cal Level列内从上到下依次输入每个浓度的代号(如1, 2, 3 ···, 或cal-1, cal-2, cal-3 ···,或者A, B, C ···等等), Amount 列内从上到下依次输入各标准溶液浓度值, 单击OK, 定量方法(内标法)建立完成.I. 保存方法: 单击File 菜单, 选择Save As, 选择保存路径并输入文件名称, 保存方法(.pmd文件).4.设置定量方法(外标法)参数:A. 定量组分的识别Identification 参数: 设定定量组分的名称Name (下拉菜单中选择New, 直接输入该组分名称), 扫描方法Filter (下拉菜单中选择该组分对应的扫描方法), 点击OK, 输入保留时间Retention time, 点击OK; (如果是多组分定量, 点击Name 栏内下拉菜单,选择NEW, 输入第二个组分名称, 其他参数设定相同). B. 定量组分积分参数设定Detection: 点击界面右上角组分(Components) 列表栏内定量组分的名称, 输入该组分各积分参数, 点击OK;C. 校正曲线Calibration参数设定: 单击Calibration 缺省菜单, 设定各参数.3.A. 组分名称Name3.A. 保留时间Retention time3.A. 扫描方法Filter组分识别Identification3.B. Name下拉菜单3.C.积分参数设定Detection3.C.积分参数3.D. 组分Components 列表OK3.E.Calibration缺省菜单3.F. 内标物ISTD3.F. 组分类型Components type3.G. Target compounds栏3.H. Level 缺省菜单3.H. 浓度列表3.H. Amount列3.H. Cal Level列D. 标准溶液浓度Levels 设定: 单击Level 缺省菜单,在左侧浓度列表内, Cal Level 列内从上到下依次输入每个浓度的代号(如1, 2, 3 ···, 或cal-1, cal-2, cal-3 ···,或者A, B, C ···等等), Amount 列内从上到下依次输入各标准溶液浓度值, 单击OK, 定量方法(外标法) 建立完成.E. 保存方法: 单击File 菜单, 选择Save As, 选择保存路径并输入文件名称, 保存方法(.pmd文件).Step 3.2 定量数据处理及定量结果浏览1.2.3.在XcaliburRoadmap 主页上，点击Sequence Setup 按钮; 打开序列: 打开在Step 2所保存的序列(单击File菜单, 选择Open打开序列;检查序列表中是否有Proc Meth和Level 两列.如没有,点击Column Arrangement 快捷图标, 出现序列表列设置工具栏, 在左侧可选项下选中Proc Meth, 点击Add, 选中Level, 点击Add, 然后单击OK.设定样品类型: 将标准样品的样品类型(Sample type) 设定为Std Bracket, 待测未知样品设定为Unknown, 空白样品设定为Blank;选择数据处理方法Proc Meth: 在Proc Meth列中双击鼠标左键(或者点击鼠标右键, 选择, 打开Step3.1 中所建立的数据处理方法;设定标准样品浓度水平: 点击各样品类型为Std Bracket 的标准样品对应的Level 列单元格, 出现一下拉菜单, 选择该标准样品对应的Cal Level 名称;保存该序列: 点击保存序列快捷图标;1. XcaliburRoadmap主页1. Sequence Setup按钮1.3. Column Arrangement图标3. Level列3. Proc Meth列7. 保存序列快捷图标3.序列表列设置工具栏3. Add按钮2.序列表列设置3.4.第3页8.9.10.数据批处理: 点击批处理Batch Reprocess 快捷图标; 出现数据处理选项工具, 选择(9) Quan及其项下Peak Integration, Quantitation, 点击OK;定量结果浏览: 在XcaliburRoadmap主页上, 点击定量结果浏览器QuanBrowser 按钮. 在出现的对话框中打开保存的序列(第7项), 在出现的View Sample Types 对话框中选择Show All sample types, 点击OK, 显示定量结果; 保存定量结果:单击File 菜单, 选择Save As, 选择保存路径并输入定量结果文件名称, 保存定量结果(. rst文件).9. 组分名称9. 结果表格9. 定量结果浏览界面8. Batch Reprocess快捷图标8. 9. XcaliburRoadmap主页定量选项9. 定量结果浏览器QuanBrowser9. 可按样品类型分类显示9. 打开序列9. Show All sample typesStep 4. 样品报告生成1.2.3.4.在定量结果浏览界面上,点击报告设置Report Dialogue 快捷图标, 出现报告设置对话框;在样品报告Sample Reports 项下表格中, 点击Enable 下单元格, 点击鼠标左键, 出现9;点击Save As 下单元格, 点击鼠标左键, 出现下拉菜单, 选择需要生成报告的文件类型(PDF, Doc, Text, Htlm…);双击报告模板Report Template Name 下单元格, 选择并打开需要的报告模板(Xcalibur软件提供的模板位置: C:\\Xcalibur\\Template);点击Select Samples 按钮, 选择要生成报告的数据文件: 选中数据文件名称, 点击Add 按钮(或直接点击Add All 按钮, 全部选择), 单击OK;单击Print Report 按钮, 生成报告;打开报告(报告保存位置与原始数据保存位置相同).1. 报告设置Report Dialogue 快捷图标1. Sample Report 表格5.6.7.5. Select Samples按钮6. Print Report 按钮5. Add 按钮5. Add All 按钮开机方法1.2.关机方法3.4.5.6.7.1.双击桌面图标，打开Quantum Tune Master界打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（Main Power 面，将质谱设置为待机Standby状态;Switch）至On（/）位置；关闭电子服务开关(Electronics Service Switch);打开真空开关（Vacuum Switch）在Operational状态；真2.关闭真空开关(Vacuum Switch);空开关开启约一小时后，打开电子开关Electronics Service 3.4.3分钟后关闭质谱主电源开关(Main Power Switch) Switch）在Operational状态；至Off (O) 位置；用密封垫或者放电针堵上离子传输毛细管；5.关闭液相部分各模块电源。打开数据处理系统，即打开计算机和打印机；双击桌面图标，打开Quantum Tune Master界面；单击Quantum Tune Master界面上图标，查看质谱状主电源开关态，确认Ion Gauge Pressure小于5×10-6Torr。电子开关打开液相部分各模块电源。真空开关第4页
