AnalysisandTesting分析检测ｄｏｉ：１０．１６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１８．１３．０４４牛乳中酪蛋白的提取以及鉴定ExtractionandIdentificationofCaseininMilk◎ 葛攀玮，陈 楚，葛庆丰，蒋栋磊（扬州大学食品科学与工程学院，江苏 扬州 225127）Ge Panwei, Chen Chu, Ge Qingfeng, Jiang Donglei(School of Food Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou 225127, China)摘 要：本实验通过提取纯化3种市售牛奶中的酪蛋白，并对所提取的酪蛋白进行SDS-PAGE鉴定。实验结果显示：所提取的酪蛋白平均浓度为2.02 mg/mL，蛋白的分子量为28 kD。关键词：牛乳；酪蛋白；SDS-PAGEAbstract：Casein is the main allergen in milk. In this study, casein was extracted and purified from three commercially available milks, and the extracted casein was identified by SDS-PAGE gel electrophoresis.The experimental results showed that the average concentration of casein extracted was 2.02 mg/mL, and the molecular weight of the protein was 28 kD.Key words：Milk; Casein; SDS-PAGE中图分类号：TS252.7牛奶是最古老的天然饮料之一，被誉为“白色血十二烷基硫酸钠（SDS）、溴酚蓝、考马斯亮蓝R250、液”[1]。酪蛋白是牛奶中的主要蛋白，占牛奶中蛋白质蛋白Marker等，购自上海生物工程股份有限公司。总量的80%[2-3]，且是牛奶中主要的过敏原。本实验以牛奶中的酪蛋白为研究对象，通过对目标蛋白的分离1.2 实验仪器纯化，进行电泳分析鉴定[4-5]。为牛奶过敏蛋白的检测台式高速冷冻离心机、H5-6多头磁力加热搅拌器、以及标准品的制备，提供一定的基础性研究。微型垂直电泳系统、凝胶电泳成像仪、台式pH计、电子天平、恒温水浴锅、脱色摇床。1 实验方法1.3 酪蛋白粗提和纯化1.1 实验原料与试剂将3种牛奶倒入离心瓶中低温离心去脂肪，过滤原料：科迪纯牛奶，伊利纯牛奶，扬大巴氏鲜牛奶。得脱脂奶，调节pH至4.6；后在4 ℃条件下离心获沉试剂：丙酮、酪蛋白标准品等均为国产分析纯试剂；淀为酪蛋白；加入等量的丙酮进一步脱脂，抽滤清洗，XIANDAISHIPIN现代食品/125分析检测Analysis and Testing留样电泳分析。将样品置于透析袋透析36 h后，取出进行冷冻干燥。1.4 蛋白含量测定以及电泳分析以蛋白质的含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。称取3种牛奶样品中粗提的和纯化的蛋白测量吸光度值，计算样品中蛋白质浓度，并采用SDS-PAGE进行鉴定分析。2 结果与分析2.1 样品蛋白含量测定通过检测标品吸光度，可建立一条标准曲线，即图1 样品的SDS-PAGE分析图y=0.027 9x+0.071 8（R²=0.999 3），带入样品蛋白的吸注：0泳道为蛋白质分子量标准；1泳道为Marker； 光度值测出各样品蛋白浓度，见表1。2、3、4泳道，均为酪蛋白。表1 样品蛋白浓度表样品蛋白浓度/（mg/mL）3 结论科迪纯化蛋白4.345 281伊利纯化蛋白2.927 121通过提取纯化酪蛋白，以及SDS-PAGE电泳分析扬大纯化蛋白2.608 124的结果，验证了酪蛋白是牛奶中的主要过敏原蛋白，与科迪粗提蛋白1.861 41伊利粗提蛋白1.606 93其他文献[6]报道相符。酪蛋白的提取条件为4 ℃离心，扬大粗提蛋白2.585 424pH 4.6，此条件下可得的酪蛋白浓度为2.02 mg/mL。由标准曲线方程以及样品蛋白的吸光度值测得样品中的蛋白浓度，可以得出3种样品的粗提蛋白参考文献：浓度均小于纯化后的蛋白浓度，而在纯化蛋白中科[1]陈 寅.牛奶、鸡蛋过敏原的鉴定、纯化及应用迪鲜奶的蛋白浓度最高，粗蛋白中伊利鲜奶的蛋白研究[D].天津：天津医科大学，2011.浓度最高。[2]张 晖，杨方琪，高福成.牛乳酪蛋白性质的研究[J].食品与生物技术学报，1995（3）：189-191.2.2 SDS-PAGE分析[3]李晓晖.牛乳中酪蛋白的结构特性及其应用[J].将纯化后的酪蛋白组分进行SDS-PAGE分析，用食品工业，2002（1）：29-31.凝胶成像与分析系统对电泳图进行光密度扫描，结果[4]WAISARAYUTT C，SUROJANAMETAKUL V，KAEWPRADUB 以28 kD区带处蛋白条带含量最为明显。查阅相关文S，et al. Investigation on the understanding 献[1]并结合图1可知，酪蛋白为牛奶中主要的过敏原and implementation of food allergen management 蛋白组分。（下转第129页）126/现代食品XIANDAISHIPINAnalysisandTesting分析检测进行微生物的培养，缩短了食品中微生物检测的时间，泛关注的焦点。但是，传统的检测食品的方法其周期提高了食品中微生物检测的准确性。较长，投入的资金较大，不利于食品的快速检测。所3 食品添加剂的快速检测方式以，本文对几种常见的食品快速检测的方式进行概述，并分析其在实际中如何检测食品中的有害物质，以期在食品添加剂的快速检测方式中，最常使用的方为相关工作者提供一定的参考。式是GC/HPLC，也可以使用薄层色谱以及分光光度比色法。食品添加剂对人体有一定的危害，不正确使用参考文献：食品添加剂对人们的身体健康会造成一定的威胁。目前，[1]张欣媛.快速检测技术在食品微生物检测中的应我国食品添加剂检测方式GC/HPLC尚处于发展阶段，用[J].食品安全导刊，2018（9）：83.不能对食品中的对添加剂进行多成分的检测。但是，国[2]朱秀玲.快速检测技术在食品检测中的应用[J].外的食品添加剂的快速检测中，可以使用GC/HPLC技山东工业技术，2016（19）：258，255.术、LC/MS、GC/MS[6]等检验方式对添加剂中的多种成[3]王 龙，朱荣光，段宏伟，等.光学快速分析技分进行检测，而且国外，如美国、欧盟等国家和地区对术在食品掺假检测中的应用[J].食品与机械，2016，食品添加剂的报道较多，相关学者对其检测的方式还32（3）：235-238.在进行深入的研究。使用这些方式可以对食品中的添[4]杜旭刚，董珍珍.快速检测技术在食品检测中的加剂进行定量分析，是政府在食品快速检验中的重要手应用[J].科技风，2015（22）：130-131，133.段之一，但是仍需要加强对此方面的研究，以保障食 [5]吴海华.多重PCR快速检测技术在食品致病微品安全。生物检测中的应用[J].现代食品，2015（17）： 4 结语43-45.[6]汪盈盈，黄 瑛，洪建光.快速检测技术在食品随着我国经济的不断发展，市场经济的弊端逐渐微生物检测中的应用[J].科技与创新，2014（13）：显露。食品安全关乎我国国民的饮食安全，是社会广51，54.（上接第126页）上科学基金项目（编号：31271945）；国家自然科学among Thai food manufacturers[J].Food Control，基金青年科学基金项目（编号：31601535）；江苏省2014（46）：182-188.自然科学基金青年基金项目（编号：BK20160459）；[5]刘 纳.酪蛋白组分分离、纯化研究[D].成都：江苏省高校自然科学研究面上项目（编号：西华大学，2010.16KJB550008）。[6]蒋红玲.牛奶主要致敏原组分的分离纯化和分析作者简介：葛攀玮（1993—），女，硕士；专业[D].广州：暨南大学，2008.方向为食品安全检测。基金项目：江苏省研究生科研与实践创新计划通讯作者：蒋栋磊（1986—），男，博士，讲师；项目（编号：SJCX17_0631）；国家自然科学基金面专业方向为食品安全检测。XIANDAISHIPIN现代食品/129
